农药残留的酶活性抑制与免疫分析技术的免疫分析法(二)

时间:2018-12-30 17:41:00 来源:荣一平台 作者:匿名


1.免疫球蛋白的类型和结构:免疫球蛋白分子由四条多肽链组成。这两条短链称为轻链(轻链,L),分子量约为25 ku。这两条长链称为重链(H),分子量为50-75 ku。有两种类型的轻链:κ和λ。在相同的免疫球蛋白分子中,两条轻链是同种型。有五个重链:α,γ,δ,ε和μ。根据免疫球蛋白重链的类型,它可以分为五类:IgA(α链),IgD(δ链),IgE(ε链),IgG(γ链)和IgM(μ链)。肽链通过二硫键(二硫键b()nd)连接,单个Ig分子具有“Y”样结构,参见图6-3。

免疫球蛋白分子分为两个区域:恒定reglon(C)和可变区(V)。对于不同的免疫球蛋白分子,轻链的N-末端的一半和重链的N-末端的1/4的氨基酸序列具有大的变化,称为可变区;其余的氨基酸序列趋于保守,称为恒定区域。可变区的某些部分的氨基酸序列变化很大,因此称为超变量regk n,HvR)。高变区仅占v区的20%至25%;剩下的75%到80%是相对保守的,称为框架区域(fraHlework regiorl)。轻链(L)和重链(H)各自含有三个高变区,其表面是抗原结合位点。由于高变区的氨基酸序列与结合的抗原形成结构互补的三维结构,因此高变区也称为互补决定区(CDR)。 γ重链,α重链和δ重链含有一个位于C区第一(CH1)和第二(CH2)结构域之间的非球形片段,氨基酸残基数小至10个以上这个区域被称为铰链区域。当抗体与抗原结合时,铰链区可自由旋转以适应不同距离的抗原决定簇。由于铰链区的弹性,抗体可以结合独特抗原的一个以上位点,并且与更多抗原结合位点的接触可以增加结合强度。免疫球蛋白的结构模型如图6.4所示。2,抗体的类型:根据制备方法,生产途径和特征,抗体分为多克隆抗体,单克隆抗体和基因工程抗体。

(1)多克隆抗体:多克隆抗体(PcAb)是指由多个B细胞产生并针对不同抗原决定簇的抗体混合物。制备方法包括用抗原直接免疫兔,绵羊等以制备抗血清,然后将抗体与抗血清分离的步骤。该多克隆抗体与抗原亲和力强,稳定性好,但抗体的同质性和特异性不如单克隆抗体好,来源间歇,且有批次差异。

(2)单克隆抗体:单克隆抗体(McAb)是通过抗原决定簇刺激单个B细胞而产生的抗体。单克隆抗体通过杂交瘤技术(也称为营养繁殖细胞技术)产生。单克隆抗体具有良好的同质性和特异性,可以在体外分批培养,没有批次差异。

(3)基因工程抗体基因工程抗体是通过使用DNA分子重组技术克隆或部分片段修饰抗体可变区中的基因而产生的免疫活性特异性多肽,然后表达它。 。基因工程抗体技术的发展使得手工设计和制备具有特殊性质和特殊功能的抗体成为可能。

(三)抗原 - 抗体反应

抗原与抗体的特异性结合称为抗原 - 抗体反应。脊椎动物身体具有免疫系统,当受到进入体内的外源物质(抗原)如细菌,病毒,细胞,组织,蛋白质等的刺激时,可以产生保护性反应,并产生特定的保护物质(抗体)来识别外源性物质

它与它结合起来“钝化”物质以消除其干扰。根据质量作用定律,抗原 - 抗体的识别和结合反应不仅可以在体内进行,而且可以在体外适当的条件下进行。该反应在体内作为体液免疫应答的效应机制在体内自然发生,并且作为体外免疫学实验的结果发生。由于传统的免疫学技术大多使用人或动物血清作为抗体来源,因此体外实验中的抗原 - 抗体反应通常被称为血清学反应。但现代抗原 - 抗体反应早已突破了血清学时代的概念。1.抗体结合能力:抗原与抗体的结合是高度特异性的,主要依赖于抗原结合位点的空间结构和范德华力的非共价键力的精确“拟合”。 。尽管抗原与抗体的结合是互补的特异性结合,但它不形成强共价键(共价键能为209.2至418.4kJ/m01),但与复杂的非共价键结合。这种较弱的结合力至少包括以下四个方面。

(1)静电吸引:抗原与抗体分子上具有相反电荷的基团之间可发生静电吸引,也称为库仑力。例如,抗体分子上的碱性氨基酸的游离氨基(单NH3)和酸性氨基酸的游离羧基(-COO-)可以在抗原分子上与带相反电荷的相应基团相互吸引。该重力的大小与两个电荷之间的距离的平方成反比,并且平均键能为约20.9kJ/mol。

(2)范德华力:当抗原和抗体彼此接近时,由于分子或原子的瞬时偶极作用引起的重力称为范德华力,它可以吸引相应的抗原和抗体。范德瓦尔斯力的组成和计算更复杂,大致与两个相互作用基团的极化程度的乘积成正比,与它们之间的距离的7次方成反比,并且键能为4.2至12.5kJ /摩尔。

(3)疏水力:当两个疏水基团在水溶液中彼此接触时,由于水分子的排斥而趋于聚集的力被称为疏水力,其也被称为疏水键。可在抗原 - 抗体反应中提供疏水基团的氨基酸残基包括亮氨酸,异亮氨酸,丙氨酸,缬氨酸,缬氨酸,苯丙氨酸,色氨酸等。由于疏水作用,抗原和抗体缩合成复合物,因此与水接触的表面积减小,亲水性降低。

(4)氢键:氢供体上的氢原子与氢受体原子之间的氢吸引构成氢键。氢供体和氢受体都是电负性原子。在抗原 - 抗体反应中,羧基,氨基和羟基是主要的氢供体,并且诸如羧基,羧基或肽键氧的原子主要是氢受体。氢键是定向的,因此比范德华力更具特异性。氢键合力与氢供体和氢受体之间的距离的六次方成反比,并且键能为约20.9kJ/mol。参考:农药残留分析

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[关键词]农药残留,酶活性抑制,免疫分析,国家标准物质网络

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